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怎樣檢測黃曲霉素

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  黃曲霉素主要是一類(lèi)真菌毒素,主要是由黃曲霉、寄生曲霉和集峰曲霉產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物。黃曲霉毒素(AFT)是迄今發(fā)現的霉菌毒素中毒性最大、對人類(lèi)健康危害極為突出的一類(lèi)霉菌毒素,有AFB1、AFB2、AFG1、AFG2等多種形式,它們存在于土壤、動(dòng)植物、各種堅果中,特別是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麥等糧油產(chǎn)品,對人和動(dòng)物有強烈的毒性。

  黃曲霉素檢測最初以薄層層析法為主,發(fā)展到高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法等多種方法普遍應用,其進(jìn)展與新的化學(xué)檢測手段和新儀器的出現密不可分。這些新方法、新手段的快速應用,為黃曲霉毒素的檢測提供了更廣泛的選擇余地,適應了不同的檢測目的和要求。

  通過(guò)這些方法都可以明確是否有黃曲霉毒素,黃曲霉素的高毒性對人類(lèi)的健康危害極大,所以必須嚴格控制農產(chǎn)品中黃曲霉素的含量,保證食品的安全。

  薄層分析法(TLC)

  TLC法是檢測黃曲霉素最為經(jīng)典的方法,也是以前最為常用的方法,至今仍為一些檢測機構所用,也是一種國標方法。其原理是針對不同的試樣,用適宜的萃取溶劑將黃曲霉素從試樣中萃取出來(lái),經(jīng)柱層析凈化后,再在薄板上展開(kāi)后分離。利用黃曲霉素的熒光特性,根據熒光斑點(diǎn)的強弱與標準比較確定其含量,對于一些組分很復雜的試樣要雙向展開(kāi),才能獲得較高的靈敏度。

  TLC法設備簡(jiǎn)單,檢測費用低,但操作繁瑣、費時(shí),萃取和凈化效果不理想,靈敏度差,對操作人員的身體健康存在較大程度的危害。

薄層分析法(TLC)

  液相色譜法(HPLC)

  液相色譜法是20世紀80年代發(fā)展起來(lái)的檢測黃曲霉毒素的方法,主要是用熒光檢測器檢測,這一檢測方法將化學(xué)分析與領(lǐng)先的計算機技術(shù)相結合,使自動(dòng)化程度得到極大提高,在實(shí)驗空間、人力和儀器都保持不變的情況下,能檢測更多的樣品。其原理是根據衍生后的黃曲霉毒素在固定相和流動(dòng)相之間的分配量不同,從而達到分離的目的,分離后的黃曲霉毒素能發(fā)射特征性熒光,被熒光檢測器捕獲后得到檢測。該方法既可采用正相色譜也可采用反相色譜。正相色譜中固定相一般使用硅膠柱,流動(dòng)相使用以50%水飽和的三氯甲烷:環(huán)己烷:乙腈:乙醇。反相色譜固定相為C18,流動(dòng)相為乙酸:乙腈:異丙醇:水(1∶5∶5∶39)。

  該法能準確地分離不同種類(lèi)的黃曲霉素(例如:AFB1、AFB2、AFG1和AFM1等),檢測速度快且定性與定量準確,檢測限低,可作為仲裁法使用,但儀器設備價(jià)格昂貴,前處理方法相對繁瑣,若用到免疫親和柱則會(huì )使試樣檢測費用增加,對操作人員的身體健康仍存在一定的危害。

液相色譜法

  酶聯(lián)免疫法(ELISA)

  ELISA法也是近年來(lái)研究開(kāi)發(fā)出來(lái)的一種較為新穎的方法。ELISA 法測定黃曲霉毒素時(shí)主要采用間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法,原理是將黃曲霉毒素的特異性抗體包被于聚苯乙烯微量反應板的孔穴中,再加入待測樣品及酶標已知抗原,兩者與特異性抗體進(jìn)行免疫競爭反應,然后加入酶底物顯色,利用酶標儀根據顯色反應顏色的深淺進(jìn)行定量。

  該方法測定結果準確可靠,操作簡(jiǎn)便,所涉及儀器及試劑比較少,回收率高,實(shí)驗步驟也比較簡(jiǎn)單,是目前國內外較為先進(jìn)的黃曲霉毒素檢測方法。但抗體壽命短且需要低溫保存,測定時(shí)假陽(yáng)性率比較高,適合于大量樣品的篩查。

酶聯(lián)免疫法

  金標試紙法

  金標試紙法,實(shí)際就是一種固相免疫分析法。其原理是利用抗體與抗原的特異性結合反應,可一步檢測黃曲霉素。

  該法可在5~10 min內完成對試樣中黃曲霉素的定性測定,具有簡(jiǎn)單、快速的特點(diǎn),且無(wú)須其他儀器設備的配合,既可在實(shí)驗室中進(jìn)行檢測,也可在現場(chǎng)進(jìn)行實(shí)地測定,但是其檢測的準確度、精度有待進(jìn)一步的研究。

金標法

  熒光定量檢測法

  南京微測熒光定量FPOCT快速檢測技術(shù)平臺,具有靈敏度高、定量范圍寬、準確度高、穩定性強、操作快速簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn),正逐步替代膠體金試紙條和酶免試劑盒等傳統快速檢測產(chǎn)品,引領(lǐng)全球食品安全和動(dòng)物疾病快速檢測從粗略定性到準確定量的升級換代。

  由于熒光定量檢測技術(shù)具有檢測精度高、重復性好、操作簡(jiǎn)單、方便攜帶和適用于現場(chǎng)檢測等優(yōu)點(diǎn),因此各糧油食品飼料加工企業(yè)都開(kāi)始逐步使用熒光定量黃曲霉毒素快速檢測儀設備用于黃曲霉檢測。

熒光定量免疫層析技術(shù)

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